发光检测
荧光检测
1． 报告基因检测受多种因素影响（载体状态、细胞状态、转染量、转染效率、裂解效率、加样精度、检测过程等），因此同批次样品检测值也可能出现浮动。所以实验一般需要做3个或3个以上复孔，并且引入另一个报告基因作为内参。2． 细胞培养时间不宜过长，12-36h内*好；长时间培养后，细胞难裂解3． 双荧光素酶...
一些常见问题： 什么是荧光素酶检测系统?如何使用荧光素酶报告基因载体? 荧光素酶报告基因与其他分子相比有哪些优点? Promega 公司的荧光素酶检测系统与其他常用的荧光素酶检测系统相比如何? pGL3 荧光素酶报告基因载体与 pGL2 荧光素酶报告基因载体有何区别? 报告基因裂解液与细胞培养裂解试...
一些常见问题： 什么是双荧光素酶报告基因测试系统 (DLR) ？ 有哪些海肾荧光素酶载体？ 用双报告基因有何优点？ 相比用CAT 或 β - 半乳糖苷酶对表达数据作归一化，双荧光素酶报告基因测试系统有何优点？ 海肾荧光素酶与萤火虫荧光素酶相比的相对活性如何？ 两个报告基因载体作共转染应用什么条件？...
双报告基因用于实验系统中作相关的或成比例的检测, 通常一个报告基因作为内对照, 使另一个报告基因的检测均一化。检测基因表达时双报告基因通常用来瞬时转染培养细胞，带有实验报告基因的载体共转染带有不同的报告基因作为对照的第二个载体。通常实验报告基因偶联到调控的启动子, 研究调控基因的结构和生理基础。报告...
荧光素酶（Luciferase）是自然界中能够产生生物荧光的酶的统称，其中*有代表性的是来自北美萤火虫（Photinus pyralis）体内的荧光素酶。萤火虫荧光素酶属于加氧酶（oxygenase），其发光反应需要O2和Mg2+参与；有辅酶A（CoA）存在时能提高反应效率，增加发光时间。萤火虫荧光...